Restrikcijas fragmenta garuma polimorfisms (RFLP) ir molekulārā ģenētiskās analīzes metode, kas ļauj identificēt indivīdus, pamatojoties uz unikāliem restrikcijas enzīms griešana noteiktos DNS reģionos.
Saukta arī par RFLP analīzi, šajā metodē tiek izmantotas priekšrocības polimorfismi atsevišķu cilvēku ģenētiskajos kodos. Kaut arī visiem sugas locekļiem ģenētiskais sastāvs ir vienāds, šīs nelielas atšķirības rada fenotipa atšķirības, piemēram, izskatu vai metabolismu, starp indivīdiem.
RFLP analīzes paņēmiens
RFLP analīzes paņēmiens ietver noteiktā apgabala sagriešanu DNS ar zināmu mainīgumu, ar restrikcijas fermentiem, pēc tam atdalot DNS fragmentus ar agarozes gēla elektroforēzi un nosakot fragmentu skaitu un relatīvos izmērus.
Restrikcijas enzīms ir ferments, olbaltumvielu molekula, kas sagriež DNS restrikcijas vietās. Būtībā DNS paraugs tiek sadalīts un sagremots ar restrikcijas fermentiem. Iegūtie fragmenti tiek atdalīti pēc to garuma, un fragmentu izmēru shēma katram pārbaudītajam atšķirsies.
Pilnam RFLP procesam nepieciešama zondes marķēšana, DNS sadrumstalotība, elektroforēze, blotēšana, hibridizācija, mazgāšana un autoradiogrāfija. Atklātais RFLP tiek vizualizēts, izmantojot rentgenstaru filmu autoradiogrāfijā, kur DNS fragmentus var apskatīt un analizēt pēc tam, kad tie ir atdalīti viens no otra ar elektroforēzes palīdzību.
Pieteikums RFLP lietošanai
Daži no RFLP analīzes pieteikumiem ietver:
- DNS pirkstu nospiedumi: Tiesu medicīnas zinātnieki var izmantot RFLP analīzi, lai identificētu aizdomās turamos, pamatojoties uz pierādījumu paraugiem, kas savākti noziegumu vietās.
- Paternitāte: RFLP izmanto arī paternitātes noteikšanā vai senču izsekošanā.
- Ģenētiskā daudzveidība: Šo paņēmienu var izmantot, pētot savvaļas dzīvnieku evolūciju un migrāciju, pētot dzīvnieku populācijas selekcijas modeļus un noteiktu slimību noteikšanu un diagnosticēšanu.
RFLP genomu variāciju noteikšanas izmantošanas paņēmiens ir būtisks rīks genoma kartēšanā un ģenētisko slimību analīzē. Ja tiek meklēta noteiktas slimības gēna atrašanās vieta noteiktā hromosomā, tad pētnieki to darītu analizējiet slimības slimnieku ģimenes locekļu DNS, pēc tam meklējiet līdzīgus mantojuma modeļus RFLP alēles.
Kad slimības gēns ir lokalizēts, RFLP analīzes veikšana citiem ģimenes locekļiem varētu atklāt mutanta gēnu nesēju vai signalizēt par kopējo slimības risku. Ir svarīgi atzīmēt, ka RFLP paņēmiens netiek plaši izmantots tagad, kad DNS analīzei kriminālistikā un vairākās citās jomās tiek izmantotas jaunākas, spēcīgākas metodes.
RFLP negatīvie aspekti
Diemžēl RFLP analīzes tehnika ir garlaicīga un lēna. Izņemot lielu DNS parauga daudzumu - paraugam parasti jābūt apmēram ceturtdaļas lielumam, kas ir samērā liels DNS paraugiem - process, sākot no zondes marķēšanas līdz mazgāšanai un autoradiogrāfijai, var ilgt pilnu mēnesi līdz pabeigts.
Cilvēka genoma projekta rezultāti ir diezgan lielā mērā aizstājuši vajadzību pēc RFLP. Projekts ļāva noteikt visu cilvēka šūnās atrodamās DNS secību, cilvēka genomu un identificēt visus cilvēka genomā esošos gēnus.