10X TBE elektroforēzes bufera protokols vai recepte

TBE un TAE tiek izmantoti kā buferi molekulārajā bioloģijā, galvenokārt elektroforēze nukleīnskābju. Tris buferšķīdumus izmanto nedaudz pamata pH apstākļos, tāpat kā DNS elektroforēzes gadījumā, jo tas uztur DNS šķīst šķīdumā un deprotonē, tāpēc tas tiks piesaistīts pozitīvajam elektrodam un migrēs caur želeja. EDTA ir sastāvdaļa šķīdumā, jo šī izplatītā helātu veidojošs līdzeklis aizsargā nukleīnskābes no fermentu noārdīšanās. EDTA helātus veido divvērtīgus katjonus, kas ir nukleāžu, kas var piesārņot paraugu, kofaktori. Tā kā magnija katjons ir DNS polimerāzes un restrikcijas enzīmu kofaktors, EDTA koncentrācija tiek turēta mērķtiecīgi zema (apmēram 1 mM koncentrācija).

Jums nav jāsterilizē šķīdums. Kaut arī nokrišņi var notikt pēc noteikta laika, izejas šķīdums joprojām ir izmantojams. Jūs varat pielāgot pH, izmantojot pH metru, un pilienīgi pievienojot koncentrētu sālsskābe (HCl). Ir lieliski uzglabāt TBE buferi istabas temperatūrā, lai gan jūs varētu vēlēties filtrēt izejas šķīdumu caur 0,22 mikronu filtru, lai noņemtu daļiņas, kas veicinātu nokrišņu veidošanos.

instagram viewer

Ja nejauši izmantosit 5X vai 10X rezerves šķīdumu, jūs iegūsit sliktus rezultātus, jo tiks ģenerēts tikpat daudz siltuma. Papildus sliktas izšķirtspējas nodrošināšanai paraugs var tikt sabojāts.

Lai arī TBE un TAE ir bieži sastopami elektroforēzes buferi, ir citas iespējas zemas molingitātes vadītspējīgiem šķīdumiem, ieskaitot litija borāta buferi un nātrija borāta buferšķīdumu. TBE un TAE problēma ir tāda, ka uz Tris bāzes veidoti buferi ierobežo elektrisko lauku, ko var izmantot elektroforēzē, jo pārāk liela uzlāde izraisa bēguļojošu temperatūru.

instagram story viewer