Fosfātu buferšķīdums vai PBS šķīdums

PBS vai buferēts ar fosfātiem sāls ir buferšķīdums tas ir īpaši vērtīgs, jo tas imitē jonu koncentrāciju, osmolaritāti un pH cilvēka ķermeņa šķidrumos. Citiem vārdiem sakot, tas ir izotonisks cilvēku risinājumiem, tāpēc bioloģiskajā, medicīniskajā vai bioķīmiskajā izpētē tas ir mazāk ticams, ka tas izraisīs šūnu bojājumus, toksicitāti vai nevēlamu nokrišņu veidošanos.

PBS šķīduma pagatavošanai ir vairākas receptes. Būtiskais šķīdums satur ūdeni, nātrija hidrogēnfosfātu un nātrija hlorīds. Daži preparāti satur kālija hlorīdu un kālija dihidrogēnfosfātu. EDTA var pievienot arī šūnu sagatavošanā, lai novērstu salipšanu.

Fosfātu buferšķīdums nav ideāls izmantošanai risinājumos kas satur divvērtīgie katjoni (Fe²⁺, Zn²⁺), jo var būt nokrišņi. Tomēr daži PBS šķīdumi satur kalciju vai magniju. Ņemiet vērā arī to, ka fosfāts var kavēt fermentatīvas reakcijas. Īpaši jāapzinās šis potenciālais trūkums, strādājot ar DNS. Kaut arī PBS ir lielisks fizioloģijas zinātnei, ņemiet vērā, ka fosfāts, kas atrodas PBS buferētā paraugā, var radīt nogulsnes, ja paraugu sajauc ar etanolu.

Tipiska 1X PBS ķīmiskā sastāva galīgā koncentrācija ir 10 mM PO₄³⁻, 137 mM NaCl un 2,7 mM KCl. Šeit ir reaģentu galīgā koncentrācija šķīdumā:

Atkarībā no mērķa, jūs varat sagatavot 1X, 5X vai 10X PBS. Daudzi cilvēki vienkārši iegādājas PBS buferšķīduma tabletes, izšķīdina tās destilētā ūdenī un pēc vajadzības pielāgo pH līmeni ar sālsskābi vai nātrija hidroksīds. Tomēr ir viegli pagatavot risinājumu no jauna. Šeit ir 1X un 10X fosfāta buferšķīduma receptes:

1. Izšķīdina reaģenta sāļus 800 ml destilēta ūdens.
2. Ar sālsskābi noregulē pH līdz vajadzīgajam līmenim. Parasti tas ir 7,4 vai 7,2. Lai izmērītu pH, izmantojiet pH metru, nevis pH papīru vai citu neprecīzu paņēmienu.
3. Pievienojiet destilētu ūdeni, lai sasniegtu 1 litra tilpumu.

Dažiem lietojumiem sterilizācija nav nepieciešama, bet, ja jūs to sterilizējat, izdaliet šķīdumu alikvotās daļās un 20 minūtes autoklāvā ar spiedienu 15 psi (1,05 kg / cm).²) vai izmantojiet filtru sterilizāciju.

Var būt fosfāta buferšķīdums uzglabā istabas temperatūrā. Tas var būt arī atdzesēts, bet var būt 5X un 10X šķīdums nogulsnes, kad atdzesē. Ja jums ir jāatdzesē koncentrēts šķīdums, vispirms to uzglabā istabas temperatūrā, līdz esat pārliecināts, ka sāļi ir pilnībā izšķīduši. Ja notiek nokrišņi, temperatūras sasilšana tos atgriezīs šķīdumā. Atdzesēta šķīduma derīguma termiņš ir 1 mēnesis.

10X ir koncentrēts vai rezerves šķīdums, ko var atšķaidīt, lai iegūtu 1X vai parastu šķīdumu. 5X šķīdums ir jāatšķaida 5 reizes, lai iegūtu normālu atšķaidījumu, savukārt 10X šķīdums jāatšķaida 10 reizes.

Lai pagatavotu 1 litra 1X PBS darba šķīdumu no 10X PBS šķīduma, 100 ml 10X šķīduma pievieno 900 ml ūdens. Tas maina tikai šķīduma koncentrāciju, nevis reaģentu gramu vai molāro daudzumu. Nevajadzētu ietekmēt pH.

Vēl viens populārs buferšķīdums ir Dulbecco fosfātu buferšķīdums vai DPBS. DPBS, tāpat kā PBS, izmanto bioloģiskiem pētījumiem un buferiem pH diapazonā no 7,2 līdz 7,6. To var uzglabāt istabas temperatūrā. Dulbecco šķīdums satur zemāku fosfāta koncentrāciju. Tas ir 8,1 mM mM fosfāta joni, bet parastais PBS ir 10 mM fosfāta. 1x DPBS recepte ir šāda:

Izšķīdina sāļus 800 ml ūdens. Izmantojot sālsskābi, noregulē pH līdz 7,2 līdz 76. Ar ūdeni pieregulē galīgo tilpumu līdz 1000 ml. Autoklāvā 20 minūtes 121 ° C temperatūrā.

• Dulbecco, R.; un citi. (1954). "Plāksnīšu veidošanās un tīru līniju izolēšana ar poliomielīta vīrusiem". Dž. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
• "Fosfātu buferšķīdums (PBS.) Cold Spring Harbor Protocols (2006). Aukstā pavasara ostas laboratorijas prese.