TBE buferšķīdums (Tris-borāts-EDTA) ir buferšķīdums, kas sastāv no Tris bāzes, borskābes un EDTA (etilēndiamīntetraetiķskābes). Šo buferi bieži izmanto agarozes gēla elektroforēzei to DNS produktu analīzē, kas izriet no PCR amplifikācijas, DNS attīrīšanas protokoliem vai DNS klonēšanas eksperimentiem.
TBE lietojumi
TBE buferis ir īpaši noderīgs, lai atdalītu mazākus DNS fragmentus (MW <1000), piemēram, mazus restrikcijas enzīms sagremojas. TBE ir lielāka buferizācijas spēja un tas nodrošinās asāku izšķirtspēju nekā TAE buferis. TAE (Tris-acetāta-EDTA) buferšķīdums ir šķīdums, kas sastāv no Trisa bāzes, etiķskābes un EDTA.
TBE parasti ir dārgāka nekā TAE, un tā inhibē DNS līzi, kas var radīt problēmas, ja ir paredzētas nākamās DNS attīrīšanas un ligācijas darbības. Veicot trīs vienkāršās darbības, uzziniet, kā padarīt TBE buferi. Izveidošanai nevajadzētu aizņemt vairāk kā 30 minūtes.
Ko tev vajag
Lai izveidotu TBE buferšķīdumu, jums būs vajadzīgas tikai četras vielas. Pārējās preces šajā sarakstā ir aprīkojums. Četras nepieciešamās vielas ir EDTA dinātrija sāls, Trisa bāze, borskābe un dejonizēts ūdens.
Attiecībā uz aprīkojumu jums būs nepieciešams pH metrs un attiecīgi kalibrēšanas standarti. Turklāt jūs vēlēsities apmēram 600 un 1500 mililitru vārglāzes vai kolbas. Jūsu apaļais aprīkojums ir graduēti cilindri, maisīšanas stienīši un maisīšanas plāksnes.
Pirms darba sākšanas pārbaudiet inventāru laboratorijā, kuru izmantosit, lai pārliecinātos, ka jums ir viss nepieciešamais. Nekas nav sliktāks par to, ka jāapstājas pa vidu risinājuma sagatavošanai, jo jums ir beigušies pareizi materiāli.
Ja jūsu laboratorija atrodas skolā vai jūsu darba vietā, sazinieties ar atbilstošo personālu, lai pārliecinātos, ka viņiem ir visas preces noliktavā. Rezultātā jūs varat ietaupīt laiku un enerģiju.
Formula ir saīsināta kā FW. Tas ir elementa atomsvars, kas reizināts ar katra elementa atomu skaitu formulā, pēc tam saskaitot visas katra elementa masas.
EDTA rezerves risinājums
EDTA risinājums būtu jāsagatavo pirms laika. EDTA pilnībā neieplūst šķīdumā, kamēr pH nav noregulēts līdz apmēram 8,0. 500 mililitru 0,5 M EDTA rezerves šķīduma nosver 93,05 gramus EDTA nātrija sāls (FW = 372,2). Tad izšķīdina to 400 mililitros dejonizēta ūdens un noregulē pH ar NaOH (nātrija hidroksīdu). Pēc tam šķīdumu papildina līdz 500 mililitru tilpumam.
TBE rezerves risinājums
Izgatavo koncentrētu (5x) TBE rezerves šķīdumu, nosverot 54 gramus Trisa bāzes (FW = 121,14) un 27,5 gramos borskābes (FW = 61.83) un izšķīdinot abus dejonizētā aptuveni 900 mililitros ūdens. Tad pievieno 20 mililitrus 0,5 M (molaritāte vai koncentrācija) EDTA (pH 8,0) un noregulē šķīdumu līdz galīgajam tilpumam 1 litrs. Šo šķīdumu var uzglabāt istabas temperatūrā, bet vecākos šķīdumos veidosies nogulsnes. Uzglabā buferi stikla pudelēs un izmet, ja ir izveidojušās nogulsnes.
TBE darba risinājums
Agarozes gēla elektroforēzei TBE buferšķīdumu var izmantot koncentrācijā 0,5x (koncentrētā materiāla atšķaidīšana attiecībā 1:10). Pamatšķīdumu atšķaida dejonizētā ūdenī desmit reizes. Galīgās izšķīdušās koncentrācijas ir 45 mM Tris-borāta un 1 mM (milimolāri) EDTA. Tagad buferis ir gatavs lietošanai agarozes želejas vadīšana.