TAE buferšķīdums ir šķīdums, kas sastāv no Tris bāzes, etiķskābes un EDTA (Tris-acetāta-EDTA). Vēsturiski tas ir visizplatītākais buferšķīdums agarozes želejai elektroforēze DNS produktu analīzēs, kas iegūtas PCR pastiprināšana, DNS attīrīšanas protokoli vai DNS klonēšana eksperimenti.
Šim buferim ir zema jonu stiprība un zema buferšķīduma spēja. Tas ir vispiemērotākais lielu (> 20 kilobāzes) DNS gabalu elektroforēzei, un tas būs bieži jāmaina vai jākirkulē ilgākam (> 4 stundām) gēla darbības laikiem. Paturot to prātā, ieteicams apsvērt iespēju izveidot vairākas bufera partijas.
Tā kā buferšķīdumu ir viegli izgatavot un soļus var veikt ātri, vairāk nekā vienas partijas izgatavošana vienlaikus nevajadzētu būt īpaši laikietilpīga vai sarežģīta. Izmantojot tālāk sniegtos norādījumus, TAE bufera pagatavošanai vajadzētu būt tikai 30 minūtēm.
Kas jums nepieciešams TAE buferim
Tā kā TAE bufera izveidošanai ir nepieciešams tikai ātrs un vienkāršs instrukciju komplekts, tam nepieciešamo materiālu skaits nav pārmērīgs. Jums būs nepieciešams tikai EDTA (etilēndiamīntetraetiķskābe) dinātrija sāls, Trisa bāze un ledus etiķskābe.
Bufera pagatavošanai nepieciešams arī pH metrs un attiecīgi kalibrēšanas standarti. Jums būs nepieciešami arī 600 mililitru un 1500 mililitru vārglāzes vai kolbas, kā arī graduētie baloni. Visbeidzot, jums būs nepieciešams dejonizēts ūdens, maisa stieņi un maisa plāksnes.
Šajās instrukcijās formulas svars (katra elementa atomu masa tiek reizināta ar atomu skaitu, pēc tam katra masa tiek summēta) tiek saīsināta kā FW.
Sagatavojiet EDTA krājuma risinājumu
EDTA risinājums tiek sagatavots pirms laika. EDTA pilnībā neieslīdēs šķīdumā, kamēr pH netiks noregulēts līdz aptuveni 8,0. Par 500 mililitru krājumu 0,5 M (molaritāte vai koncentrācija) EDTA šķīdums, nosver 93,05 gramus EDTA dinātrija sāls (FW = 372,2). Izšķīdina to 400 mililitros dejonizētā ūdenī un noregulē pH ar nātrija hidroksīdu (NaOH). Uzpildiet šķīdumu līdz 500 mililitru tilpumam.
Izveidojiet savu akciju risinājumu
Pagatavo koncentrētu (50x) TAE rezerves šķīdumu, nosverot 242 gramus Tris bāzes (FW = 121,14) un izšķīdinot to apmēram 750 mililitros dejonizēta ūdens. Uzmanīgi pievieno 57,1 mililitrus ledus skābes un 100 mililitrus 0,5 M EDTA (pH 8,0).
Pēc tam šķīdumu noregulē līdz galīgajam tilpumam 1 litrs. Šo rezerves šķīdumu var uzglabāt istabas temperatūrā. Šī buferšķīduma pH nav pielāgots, un tam vajadzētu būt apmēram 8,5.
Sagatavojiet TAE bufera darba risinājumu
1x TAE buferšķīduma darba šķīdumu sagatavo, vienkārši atšķaidot izejas šķīdumu 50 reizes dejonizētā ūdenī. Galīgās izšķīdušās koncentrācijas ir 40 mM (milimolāri) Trisacetāta un 1 mM EDTA. Tagad buferis ir gatavs lietošanai agarozes želejas darbināšanai.
Iesaiņošana
Pirms sākat pārbaudīt inventāru, pārliecinieties, vai jums ir visi iepriekš minētie materiāli TAE buferim. Jūsu piegādes personālam vajadzētu būt spējīgam pateikt, vai viņa noliktavā ir visas nepieciešamās preces. Jūs nevēlaties, lai procedūras vidū kaut kas pietrūktu.