Gram traipu procedūra mikrobioloģijā

Gram traips ir diferencēta krāsošanas metode, ko izmanto, lai piešķirtu baktērijas vienai no divām grupām (grampozitīvā un gramnegatīvā), pamatojoties uz viņu šūnu sienas. To sauc arī par Gram krāsošanu vai Gram metodi. Procedūra nosaukta personai, kura izstrādājusi šo metodi, dāņu bakteriologs Hanss Kristians Grams.

Procedūras pamatā ir reakcija starp peptidoglikānu dažu baktēriju šūnu sieniņās. Gram traips ietver baktēriju iekrāsošanu, krāsas piestiprināšanu ar kodinātāju, šūnu atkrāsošanu un pretkrāsas uzklāšanu.

1. Primārais traips (kristālviolets) saistās ar peptidoglikānu, krāsojot šūnas purpursarkanā krāsā. Gan grampozitīvām, gan gramnegatīvām šūnām šūnu sieniņās ir peptidoglikāns, tāpēc sākotnēji visas baktērijas krāso violeti.
2. Grama jods (jods kālija jodīds) tiek izmantots kā kodinātājs vai fiksējošs līdzeklis. Grampozitīvas šūnas veido kristālvioletā-joda kompleksu.
3. Alkohols vai šūnu atkrāsošanai izmanto acetonu. Gramnegatīvo baktēriju šūnu sienās ir daudz mazāk peptidoglikāna, tāpēc šis solis būtībā padara tās bezkrāsainas, savukārt no grampozitīvajām šūnām, kurās ir vairāk peptidoglikāna (60–90% no šūnas sienas), tiek noņemta tikai daļa krāsas. Grampozitīvo šūnu biezā sienas siena tiek dehidrēta ar atkrāsošanas darbību, izraisot to saraušanos un notverot traipu-joda kompleksu iekšpusē.
   instagram viewer
4. Pēc krāsas nokrāsošanas baktēriju rozā krāsā uzklāj virskārtu (parasti safranīnu, bet dažreiz fuksīnu). Gan grampozitīvās, gan gramnegatīvās baktērijas uztver rozā traipu, bet tas nav redzams virs grampozitīvo baktēriju tumšākas purpursarkanas. Ja krāsošanas procedūra tiek veikta pareizi, grampozitīvās baktērijas būs purpursarkanas, bet gramnegatīvās baktērijas - rozā.

Tiek apskatīti Gram traipa rezultāti izmantojot gaismas mikroskopiju. Tā kā baktērijas ir krāsainas, tiek identificēta ne tikai to Gram traipu grupa, bet viņu formaVar novērot izmēru un salipšanas modeli. Tas padara Gram traipu par vērtīgu diagnostikas rīku medicīnas klīnikā vai laboratorijā. Kaut arī traips var nebūt iespējams identificēt baktērijas, bieži vien, zinot, vai tās ir grampozitīvas vai gramnegatīvas, pietiek ar efektīvas antibiotikas izrakstīšanu.

Dažas baktērijas var būt grama mainīgas vai nenoteiktas. Tomēr pat šī informācija var būt noderīga, lai sašaurinātu baktēriju identitāti. Paņēmiens ir visuzticamākais, ja kultūras ir mazāk nekā 24 stundas vecas. Lai gan to var izmantot buljonu kultūrām, vislabāk tos vispirms centrifugēt. Metodes galvenais ierobežojums ir tas, ka tā dod kļūdainus rezultātus, ja tehnikā tiek pieļautas kļūdas. Lai iegūtu ticamu rezultātu, ir nepieciešama prakse un prasmes. Arī infekcijas izraisītājs var nebūt baktēriju. Eikariotu patogēni iekrāso gramnegatīvus. Tomēr lielākā daļa eikariotu šūnas izņemot sēnītes (ieskaitot raugu) procesa laikā nespēj pieturēties pie slaida.

• Kristālviolets (primārais traips)
• Grama jods (kodinātājs, lai šūnā nostiprinātu kristālvioletu)
• Etanols vai acetons (atkrāsotājs)
• Safranīns (sekundārais traips vai virskārtas krāsa)
• Ūdens strūkla pudelē vai pilinātājā
• Mikroskopa slaidi
• Saliktais mikroskops

1. Ievietojiet nelielu pilienu baktēriju parauga uz priekšmetstikliņa. Siltumu piestiprina baktērijas pie priekšmetstikliņa, trīs reizes izlaižot to caur Bunsena degļa liesmu. Pielietojot pārāk daudz siltuma vai pārāk ilgi, baktēriju šūnu sienas var izkausēt, izkropļot to formu un radīt nepareizu rezultātu. Ja tiek uzlikts pārāk maz siltuma, krāsošanas laikā baktērijas mazgā priekšmetstikliņu.
2. Izmantojiet pilinātāju, lai priekšmetstikliņam uzklātu primāro traipu (kristālvioleto krāsu) un ļauj tam sēdēt 1 minūti. Viegli noskalojiet priekšmetstikliņu ar ūdeni ne ilgāk kā 5 sekundes, lai notīrītu lieko traipu. Pārāk ilga skalošana var noņemt pārāk daudz krāsas, savukārt, ja netiek skalota pietiekami ilgi, tas var ļaut pārāk daudz traipu palikt uz gramnegatīvām šūnām.
3. Izmantojiet pilinātāju, lai uz priekšmetstikliņa uzklātu Grama jodu, lai kristālvioletu piestiprinātu pie šūnas sienas. Ļaujiet tai sēdēt 1 minūti.
4. Apmēram 3 sekundes noskalojiet priekšmetstikliņu ar spirtu vai acetonu, pēc tam nekavējoties viegli noskalojiet ar ūdeni. Gramnegatīvās šūnas zaudēs krāsu, savukārt grampozitīvās šūnas paliks violetas vai zilas. Tomēr, ja atkrāsotāju atstāj pārāk ilgi, visas šūnas zaudēs krāsu!
5. Uzklājiet sekundāro traipu, safranīnu un ļaujiet tam sēdēt 1 minūti. Viegli noskalojiet ar ūdeni ne ilgāk kā 5 sekundes. Gramnegatīvajām šūnām jābūt iekrāsotām sarkanā vai rozā krāsā, savukārt grampozitīvajām šūnām joprojām būs violeta vai zila krāsa.
6. Skatiet priekšmetstikliņu, izmantojot saliktu mikroskopu. Lai atšķirtu šūnas formu un izvietojumu, var būt nepieciešams palielinājums no 500x līdz 1000x.

Ne visas baktērijas, kuras identificē ar Gram traipu, ir saistītas ar slimībām, bet daži svarīgi piemēri ir šādi:

• Grampozitīvi kokči (apaļi):Staphylococcus aureus
• Gramnegatīvie kokči:Neisseria meningitidis
• Grampozitīvi bacili (stieņi): Bacillus anthracis
• Gramnegatīvas baciles:Escherichia coli